Produtos
Kit de detección Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR para 2019-nCoV
Uso esperado
Este kit utilízase para a detección cualitativa do novo coronavirus (2019-nCoV) mediante hisopos de garganta, hisopos nasofarínxeos, líquido de lavado broncoalveolar, esputo. O resultado da detección deste produto é só para referencia clínica e non debe usarse como único. evidencias para o diagnóstico clínico e o tratamento. Recoméndase unha análise exhaustiva da condición en combinación coas manifestacións clínicas do paciente e outras probas de laboratorio.
Principio de inspección
O kit baséase na tecnoloxía RT-PCR dun paso.De feito, seleccionáronse os xenes ORF1ab e N do novo coronavirus (2019-nCoV) de 2019 como rexións obxectivo de amplificación.Cebadores específicos e sondas fluorescentes (as sondas do xene N están marcadas con FAM e as sondas ORF1ab están etiquetadas con HEX) están deseñados para detectar ARN de coronavirus de novo tipo 2019 nas mostras.O kit tamén inclúe un sistema de detección de control interno endóxeno (sonda xenética de control interna marcada con CY5) para supervisar o proceso de recollida de mostras, amplificación de ARN e PCR, reducindo así os falsos negativos.
Principais compoñentes
| Compoñentes | Volume（48T/Kit） |
| Solución de reacción RT-PCR | 96 µl |
| Mezcla de sonda TaqMan de cebador nCOV (ORF1ab, xene N, xene RnaseP) | 864 µl |
| Control negativo | 1500 µl |
| nCOV control positivo (l ORF1ab N Gene) | 1500 µl |
Reactivos propios: reactivos de extracción ou purificación de ARN.Control negativo/positivo: o control positivo é o ARN que contén o fragmento diana, mentres que o control negativo é auga sen ácido nucleico.Durante o seu uso, deben participar na extracción e deben considerarse infecciosas.Deberán manipularse e eliminarse de acordo coa normativa aplicable.
O xene de referencia interno é o xene RnaseP humano.
Condicións de almacenamento e data de caducidade
-20 ± 5 ℃, evitar a conxelación e desconxelación repetidas máis de 5 veces, válido durante 6 meses.
Instrumento aplicable
Con FAM / HEX / CY5 e outro instrumento de PCR fluorescente multicanle.
Requisitos dos exemplares
1.Tipos de mostras aplicables: hisopos de garganta, hisopos nasofarínxeos, líquido de lavado broncoalveolar, esputo.
2. Recollida de mostras (técnica aséptica)
Hisopo farínxeo: limpe as amígdalas e a parede posterior da farínxea con dous hisopos ao mesmo tempo e, a continuación, mergullo a cabeza do hisopo nun tubo de ensaio que contén a solución de mostraxe.
Esputo: despois de que o paciente teña unha tose profunda, recolla o esputo tose nun tubo de ensaio con tapa de rosca que contén a solución de mostraxe;Fluído de lavado broncoalveolar: toma de mostras por profesionais médicos.3.Almacenamento e transporte de mostras
As mostras para o illamento de virus e as probas de ARN deben ser probadas o antes posible.As mostras que se poden detectar en 24 horas pódense almacenar a 4 ℃;aqueles que non se poden detectar no prazo de 24
horas deben almacenarse a -70 ℃ ou menos (se non hai unha condición de almacenamento de -70 ℃, deberían ser
almacenado temporalmente nun frigorífico de -20 ℃).As mostras deben evitar a conxelación e desconxelación repetidas durante o transporte.As mostras deben enviarse ao laboratorio o antes posible despois da recollida.Se as mostras deben ser transportadas a longas distancias, recoméndase o almacenamento de xeo seco.
Métodos de proba
1 Procesamento da mostra e extracción de ARN (área de procesamento da mostra)
Recoméndase tomar 200 μl de mostra líquida para a extracción de ARN.Para os pasos de extracción relacionados, consulte as instrucións dos kits de extracción de ARN comerciais.Tanto o negativo como o negativo
Os controis deste kit participaron na extracción.
2 Preparación de reactivos de PCR (área de preparación de reactivos)
2.1 Elimina todos os compoñentes do kit e desconxela e mestura a temperatura ambiente.Centrifugar a 8.000 rpm durante uns segundos antes de usar;Calcule a cantidade necesaria de reactivos e prepárase o sistema de reacción tal e como se indica na seguinte táboa:
| Compoñentes | Porción N (sistema de 25 µl) |
| Cebador de nCOV TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Solución de reacción RT-PCR | 2 µl × N |
| *N = número de mostras analizadas + 1 (control negativo) + 1 (nCOVcontrol positivo) | |
2.2 Despois de mesturar ben os compoñentes, centrifugue durante un breve tempo para que todo o líquido da parede do tubo caia ao fondo do tubo e, a continuación, alícuote o sistema de amplificación de 20 µl no tubo de PCR.
3 Toma de mostras (área de preparación da mostra)
Engadir 5 μl dos controis negativos e positivos despois da extracción.O ARN da mostra que se vai probar engádese ao tubo de reacción de PCR.
Tape o tubo ben e centrifugue a 8.000 rpm durante uns segundos antes de transferilo á área de detección de amplificación.
4 Amplificación por PCR (área de detección amplificada)
4.1 Coloque o tubo de reacción na cela da mostra do instrumento e configure os parámetros do seguinte xeito:
| etapa | Ciclo número | Temperatura(°C) | Tempo | colecciónsitio |
| Inversatranscrición | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pre-desnaturalizaciónn | 1 | 95 | 1 min | - |
| Ciclo | 45 | 95 | 15 segundos | - |
| 60 | anos 30 | recollida de datos |
Selección da canle de detección do instrumento: seleccione a canle FAM, HEX, CY5 para o sinal de fluorescencia.Para referencia fluorescente NINGUNHA, por favor, non escolla ROX.
5 Análise de resultados (consulte as instrucións experimentais de cada instrumento para a configuración)
Despois da reacción, garda os resultados.Despois da análise, axuste o valor inicial, o valor final e o valor limiar da liña de base segundo a imaxe (o usuario pode axustarse segundo a situación real, o valor inicial pódese establecer entre 3 e 15, o valor final pódese configurar en 3 ~ 15). 5~20, axuste) no gráfico logarítmico No limiar da xanela, a liña limiar está na fase logarítmica e a curva de amplificación do control negativo é unha liña recta ou por debaixo da liña limiar).
6 Control de calidade (na proba inclúese un control de procedemento) Control negativo: non hai curva de amplificación obvia para as canles de detección FAM, HEX, CY5n
Control positivo COV: curva de amplificación obvia das canles de detección FAM e HEX, valor Ct≤32, pero ningunha curva de amplificación da canle CY5;
Os requisitos anteriores deben cumprirse simultaneamente no mesmo experimento;en caso contrario, o experimento non é válido e debe repetirse.
7 Determinación de resultados.
7.1 Se non hai unha curva de amplificación ou un valor Ct> 40 nas canles FAM e HEX da mostra de proba, e hai unha curva de amplificación na canle CY5, pódese xulgar que non hai novo coronavirus de 2019 (2019-nCoV) ARN na mostra;
.2 Se a mostra da proba ten curvas de amplificación obvias nas canles FAM e HEX, e o valor Ct é ≤40, pódese xulgar que a mostra é positiva para o novo coronavirus de 2019 (2019-nCoV).
7.3 Se a mostra de proba ten unha curva de amplificación clara só nunha canle de FAM ou HEX, e o valor Ct é ≤40 e non hai curva de amplificación na outra canle, os resultados deben ser probados de novo.Se os resultados da nova proba son consistentes, pódese xulgar que a mostra é positiva para a nova
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Se o resultado da nova proba é negativo, pódese xulgar que a mostra é negativa para o novo coronavirus de 2019 (2019-nCoV).
Valor de xuízo positivo
O método da curva ROC úsase para determinar o valor de referencia CT do kit e o valor de referencia de control interno é 40.
Interpretación dos resultados das probas
1.Cada experimento debe ser probado para controis negativos e positivos.Os resultados das probas só se poden determinar cando os controis cumpren os requisitos de control de calidade
2.Cando as canles de detección FAM e HEX son positivas, o resultado da canle CY5 (canle de control interno) pode ser negativo debido á competencia do sistema.
3.Cando o resultado do control interno é negativo, se as canles de detección FAM e HEX do tubo de ensaio tamén son negativas, significa que o sistema está desactivado ou que o funcionamento é incorrecto, a proba non é válida.Polo tanto, as mostras deben ser probadas de novo.
